pETDuet-1載體被設計用來在大腸桿菌中同時表達兩個外源基因. 載體含有兩個多克隆位點，每一個多克隆位點是通過T7啟動子/Lac操縱子和一個核糖體結合位點組成。pETDuet-1攜帶有pBR322質粒來源的ColE1復制子, lacI基因和氨芐抗性基因。

本載體可以與pACYCDuet-1載體聯合使用，在合適的宿主菌中，可以一起共表達至多4個目的基因。插入在pETDuet-1載體多克隆位點1的目的基因可以使用pET Upstream Primer (Cat. No. 69214-3)和DuetDOWN1 Primer (Cat. No. 71179-3)進行測序，插入在多克隆位點2的目的基因可以通過DuetUP2 Primer (Cat. No. 71180-3)和T7 Terminator Primer (Cat. No. 69337-3)進行目的基因測序。