**組化遇到的問(wèn)題及其解決辦法（表）

1、染色過(guò)強(qiáng)：

原因	解決辦法
抗體的濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)	降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4℃過(guò)夜
孵育溫度過(guò)高，孵育溫度超過(guò)37℃	一般室溫20-28℃
DAB顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或DAB濃度過(guò)高	顯色時(shí)間不能超過(guò)5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)

2、非特異性背景染色：

3、染色弱：

原因	解決辦法
抗體濃度過(guò)低，孵育時(shí)間過(guò)短	提高抗體濃度，孵育時(shí)間不能少于60分鐘
試劑超過(guò)有效使用期	及時(shí)更換試劑
操作中，滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋	每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥）
室溫太低，低于15℃	若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱過(guò)夜）
蛋白封閉過(guò)度	封閉時(shí)間不要超過(guò)10分鐘

4、染色陰性：

原因	解決辦法
操作步驟錯(cuò)誤	重新試驗(yàn)，設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照
組織中無(wú)抗原	設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照片，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果
一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤	仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無(wú)誤