質粒DNA提取遇到的難題

從來沒有遇到過質粒提不出來的情況，不過既然出現這種情況，就要想辦法解決啊！常規來說有兩個方面需要注意。一是搖菌的問題。二是提取的問題。不過從你的描述，我覺得你主要在搖菌上有問題，提取過程你都非常注意了，不過純度不是很好，還需要改進，注意蛋白的污染。關于搖菌，需要注意以下幾點。**，就是原始菌，是不是含質粒菌，有沒有被污染，有沒有死亡，如果你的原始菌沒有質粒或者很少很少，那么你怎么提也是提不出來的。**，就是***是否加的正確，濃度是多大，有沒有失效等，需要一定的濃度，如果濃度不夠，質粒菌就會越來越少，知道*后被雜菌給取代了，當然也是提不出質粒來。第三，搖菌的時間，要合適，不能長也不能短，一般過夜，大約12-16小時為*好，可以適當延長到18小時，時間太長，超過對數生長期，**的死亡就會增多，導致質粒提取的效率下降。第四，搖菌的溫度是不是合適，用溫度計測測搖床的溫度，有時這點容易被忽視。好像就這些了，考慮一下是不是有這些問題。